美國加州大學開發了SunTag技術
[內容提要]:記者獲悉到由美國加州大學Ronald Vale實驗室的博士后Marvin Tanenbaum開發了一項SunTag新技術。他在目的蛋白中加入多個拷貝(多達24個)的多肽表位,將這個蛋白與能識別該表位的熒光抗體共表達。
近日,記者獲悉到由美國加州大學Ronald Vale實驗室的博士后Marvin Tanenbaum開發了一項SunTag新技術。他在目的蛋白中加入多個拷貝(多達24個)的多肽表位,將這個蛋白與能識別該表位的熒光抗體共表達。
一般情況下,成像細胞中的單個RNA或DNA分子是在目標分子中插入多個拷貝的特定序列,讓熒光標記的蛋白能夠結合上來。這個序列的拷貝數越多,目標分子結合的熒光蛋白就越多,信號也就越明亮。“何不對蛋白做這種處理呢?”加州大學Ronald Vale實驗室的博士后Marvin Tanenbaum開始著手解決這個問題。
此前成像細胞內蛋白的主要方式是,在其序列中填入一個發熒光的結構域(比如綠色熒光蛋白GFP)。在一般熒光顯微鏡下,帶GFP結構域的單個蛋白是很暗淡的,但添加太多GFP結構域又會讓蛋白變得過大。
Tanenbaum為此開發了SunTag技術。他在目的蛋白中加入多個拷貝(多達24個)的多肽表位,然后將這個蛋白與能識別該表位的熒光抗體共表達。這一技術發表在近期的Cell雜志上。
“這個技術主要在于它比較簡單,”Albert Einstein醫學院的Robert Singer說。Tanenbaum和同事對這一系統進行了大量的優化工作,這樣的努力是值得的。
SunTag在目標蛋白上添加多個微小的多肽表位(橙色),允許人們給一個蛋白添加多個標簽。這些表位可以招募連有熒光標記的單鏈抗體scFv。
SunTag可以用來增強轉錄。研究人員設計了一個定位到某基因啟動子區域的dCas9,在上面連接了一串多肽表位,讓它攜帶多拷貝的轉錄激活子VP64,有此增加了這個基因的轉錄。